《表2 实验所用引物：UPRE-lac Z为报告基因评价酵母UPR响应初步研究》

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《UPRE-lac Z为报告基因评价酵母UPR响应初步研究》

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以pRS42H-gRNA为出发材料构建得到pRS42H-g LEU2（见表1）的流程参见文献[20]方法，概述如下:（1）制备pRS42H-gRNA PCR产物:以质粒pRS42H-gRNA的Not I酶切线性化片段为PCR扩增模板，使用引物对P1和P2（见表2）进行扩增，反应条件为:95℃5min，94℃30 sec，52℃30 sec，72℃5 min，循环30次，末次72℃延伸10min；（2）连接和转化:将（1）所得片段使用诺唯赞公司的无缝重组试剂盒按说明书进行首尾连接，然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，用LB+Amp100平板进行筛选；（3）转化子鉴定:LB+Amp100平板生长菌落接种LB+Amp100液体培养基过夜培养，用CTAB法提取质粒，对质粒提取物进行酶切鉴定和测序。