《表3 实验所用引物：提高酿酒酵母异戊二烯产量的代谢途径的挖掘》

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《提高酿酒酵母异戊二烯产量的代谢途径的挖掘》

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注：下划线部分为酶切位点

将来自Populus alba的ispS序列[15]进行合成并将密码子按照酿酒酵母偏好性进行优化，以ispS-F，ispS-R扩增ispS基因序列，获得基因长度为1 788 bp的ispS基因。PCR程序：95℃预变性5 min；95℃变性30 s；55℃退火30 s，72℃延伸2 min，34个循环；72℃后延伸5 min。PCR产物经胶回收纯化后，连接载体pESC-His，小量抽提质粒酶切鉴定，进行DNA测序。以大肠杆菌基因组为模板，用EcIDI1-F、EcI-DI1-R扩增EcIDI1，获得大小549 bpEcIDI1基因。PCR程序同上，但延伸时间为30 s。PCR产物经胶回收纯化。以pUG6质粒为模板，用MPC2-F和MPC2-R分别扩增含有MPC2的上游、下游50 bp序列的KanMX基因，同理分别用PDA1-F、PDA1-R和POR2-F、POR2-R扩增KanMX基因。PCR程序同上。PCR产物经胶回收纯化（引物序列见表3）。