《表1 S.cerevisiae PDE1蛋白原液酶活性》

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《酿酒酵母环核苷酸磷酸二酯酶1的异源表达、分离纯化与活性检测》

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注：a.被标记的3H在闪烁计数器下的闪烁次数；对照为不加PDE1蛋白的assay buffer。

对纯化后的PDE1蛋白进行酶活性测定，如表1所示，PDE1蛋白活性较高，对cAMP的水解率到90%以上。进一步证明经3次纯化后重组目的蛋白能够保持其原有的生物学特性。为验证S.cerevisiae PDE1蛋白是一种能够同时水解cAMP和cGMP的酶，通过不同质量浓度的蛋白水解两种底物的产物转化率进行线性分析，结果如图7所示。随着蛋白质量浓度的升高，底物转化率也升高，且具有一定的线性关系。结果证明，在MnCl2催化下，150 ng/mL S.cerevisiae PDE1蛋白对3H-cAMP的底物转化率能达到50%左右，而在300 ng/mL S.cerevisiae PDE1蛋白质量浓度条件下，对3H-cGMP的底物转化率能达到50.5%。此结果印证了关于S.cerevisiae PDE1蛋白是一种双底物酶的结论，同时，也证明本实验纯化蛋白具有很高的生物活性。