《表1 q RT-PCR实验中引物序列》

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《柴胡皂苷-d对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和转移的抑制作用》

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qRT-PCR实验步骤同参考文献[5]，通过qRT-PCR的相对表达检测上述两组MDA-MB-231的细胞周期和凋亡相关mRNA的表达（表1）。通过实时半定量监测PCR扩增，选择GAPDH为内参基因，两组各重复3次，用2-△△Ct法对样本基因进行表达差异相对定量分析，在扩增的指数期对起始模板进行定量，扩增指数越高，相对表达越高。Western印迹实验基本步骤同参考文献[6]，两组中细胞处理步骤同前述。收集两组MB-231并提取细胞蛋白，BCA法测定细胞蛋白浓度，取50μg/孔蛋白在凝胶电泳仪上进行蛋白电泳，将上下层分离后的蛋白转膜至PVDF膜上，室温下TBST液封闭2～3 h后，分别加入周期，凋亡和转移相关抗体。约12 h后室温下复温、孵育二抗、显色、曝光；并使用Quantity One软件分析蛋白相对灰度值表达值；两组各重复3次。