《表1 在Mekk敲除中的Cas9和gRNA体外转录信息》

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《基于Mekk2~(-/-)小鼠研究贞术调脂胶囊调控β-catenin泛素化的成骨机制》

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采用CRISPR/Cas9技术，利用非同源重组修复引入突变的方式，造成Mekk2基因蛋白读码框移码，功能缺失，敲除设计策略见图1。具体操作如下:通过体外转录的方式，获得Cas9 mRNA和gRNA。将Cas9 mRNA和gRNA（Cas9和gRNA体外转录信息见表1）显微注射到C57BL/6 J小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠。在获得F0代小鼠后，经PCR产物测序确认，共获得8只目的基因蛋白读码框移码的F0代小鼠；选取阳性的F0代小鼠分别与野生型C57BL/6 J小鼠交配，获得的F1代小鼠。鉴定方法同F0代小鼠鉴定。选取F1代刚出生乳鼠用于原代成骨细胞提取，选取F1代的6-8周敲除小鼠用于MicroCT检测。