《表2 不良反应发生情况:利用CRISPR/Cas9鉴定玉米发育相关基因ZmCen》

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《利用CRISPR/Cas9鉴定玉米发育相关基因ZmCen》


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将筛选正确的重组中间载体p Sg A-T-gRNA经Asc I/Xba I双酶切后,按照表2体系,将中间载体连接至表达载体p OMS01-Cas9(Asc I/Xba I双酶切),重组表达载体p OMS01-Cas9-Zm Cen-sgRNA构建体系见表2,于22℃水浴中反应1h。反应完成后以热激法转化连接产物至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,挑取单菌落,采用p OSCas9-F/R引物扩增、测序验证,将阳性克隆提取质粒后,采用冻融法转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105细胞,甘油中-80℃冷冻保存备用。