《表6 SRAP有效引物及最优退火温度》

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《石斛属部分植物SRAP-PCR反应体系的建立与优化》

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运用正交试验和单因素试验设计相结合，最终确定石斛SRAP-PCR最优反应体系为Mg2+2.5 mmol/L，d NTPs 0.25 mmol/L，Taq DNA聚合酶1.25 U，引物0.4μmol/L，模板DNA 30 ng，2.5μL 10×buffer，剩余用dd H2O补齐，共25μL体系。扩增反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性1 min，36℃复性1 min，72℃延伸1 min，5次循环；94℃变性1 min，根据引物退火温度复性1 min，72℃延伸1 min，30次循环；72℃延伸7 min，最后设定4℃保存。依据石斛优化后的最优反应体系和扩增程序，对56对引物进行扩增，最终筛选出15对有效引物（表6）。以31种石斛属植物和金石斛的DNA为模板，用筛选出的有效引物在已优化的SRAP反应体系及扩增程序下进行扩增，扩增条带清晰度高（图9），符合试验要求。