《表1 引物序列与退火温度》

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《杂交构树叶水提液联合抗菌药对多重耐药菌的体外抑菌效果研究》

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菌株加到30%甘油中，放于-4℃冰箱保存，将4株多重耐药菌分别接种到LB试管肉汤中放入37℃恒温摇床振荡培养过夜，然后接种环分别划线到伊红美蓝琼脂培养基、LB琼脂培养基、7.5%氯化钠琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基上，37℃培养16～18 h。引物参照Gen Bank中登录的tet C基因序列进行设计，tet C引物、CTX-M-9引物、fosA3引物、aac（6’）-Ib引物、CTX-MU引物、TEM引物送由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。参考孙燕杰等（2016）设计的16S rDNA（表1）进行4株多重耐药菌的PCR及琼脂糖凝胶电泳。PCR反应体系为25μL（MIX:12.5μL；去离子水8.5μL；上、下游引物各1μL；菌液DNA模板2μL），PCR扩增条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s；退火温度见表1，复性30 s；72℃延伸1 min；循环30次；72℃，10 min。16S rDNA送至武汉金凯瑞生物有限公司测序。