《表1 引物序列及退火温度》

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《EGFR-TKI获得性耐药相关T790M突变与非小细胞肺癌上皮间质转化和IGF-1R的相关性研究》


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基因mRNA表达量检测:取适量肺癌组织,采用北京康为世纪公司生产的超纯RNA提取试剂盒及SuperRT cDNA第一链合成试剂盒提取肺癌组织中的RNA并反转录为cDNA;取cDNA 2μL与UltraSYBR Mixture试剂10μL、引物混合物0.8μL、去离子水7.2μL混合为反应体系,95℃15 s、特异性退火温度15 s、72℃25 s,共40个循环(表1)。在软件中生成反应曲线及Ct值,计算E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、IGF-1R、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)的mRNA表达量。