《表1 PCR扩增引物序列及长度》

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《贵阳部分医院产ESBLs肺炎克雷伯菌分子流行病学及相关耐药基因研究》

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引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。PCR反应体系为50μL:0.25μL TaqExDNA聚合酶、5μL的10×PCR Buffer、4μL的dNTP混合物、2μL的质粒DNA模板、3μL相应引物见表1，各15pmol/L、32.75μL的无菌去离子水。TaqExDNA聚合酶、PCR Buffer、dNTP由购自TaKaRa公司。扩增条件：95℃预变性3 min；95℃解链25s。64℃退火30s，75℃延伸30s，进行30个循环扩增。PCR扩增仪为Bio-Rad公司产品。测序法（IlluminaHiSeq 2000，上海宝腾生物技术有限公司完成）对部分阳性产物进行测序，结果与基因库颁布的序列进行比较。