《表1 PCR引物序列及扩增产物长度》

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《碳青酶烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因检测及同源性分析》

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煮沸法提取DNA模板，PCR法扩增bla KPC、bla IMP、bla SIM、bla NDM、bla SPM、bla GIM、bla VIM基因，引物设计参照相关文献[6-7]，具体见表1。反应体系为50μL（上下游引物各1μL，PCR Mix 25μL，DNA模板1μL，ddH2O 22μL），95℃预变性2 min，95℃45 s，55℃（不同引物退火温度略有不同）退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环，72℃延伸10 min。扩增产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶成像分析系统观察结果。目的产物送上海捷瑞生物公司进行测序，测序结果用BLAST与GenBank已知序列比对以确定其基因型别。