《表2 荧光定量PCR引物》

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《马铃薯DRO1基因的克隆和逆境响应分析》

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采用天根生化科技（北京）有限公司的总RNA提取试剂盒提取马铃薯试管苗的RNA，电泳检测质量，微量分光光度计测定RNA浓度，用TOYOBO反转录试剂盒将RNA反转录合成c DNA，根据StDRO1序列设计引物，引物序列见表2。使用Ta KaRa的SYBR Premix EX Taq试剂盒和荧光定量PCR仪（Applied Biosystems?Quant Studio?5）进行实时荧光定量PCR，PCR反应总体系为25μL，分别是12.5μL SYBR@Premix Ex TapTM （2×）、1μL PCR Forward Primer （10μmol·L-1）、1μL PCR Reverse Primer （10μmol·L-1）、0.5μL模板（c DNA溶液）和10μL dd H2O。PCR程序使用三步法，首先95°C作用3min，然后变性（95°C 30 s）、退火（58°C 30 s）、延伸（72°C 30 s）共35个循环，最后溶解曲线的温度分别是95、55和95°C，应用2-??CT的方法计算St DRO1基因的相对表达量。