《表2 荧光定量PCR引物》

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《茶树CsAAPs亚家族基因的克隆与表达分析》

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采用荧光定量PCR技术分析Cs AAPs亚家族基因的时空表达变化。根据各基因核酸序列，用Primer Premier 5软件进行荧光定量特异引物设计，如表2所示。该试验以茶树的GADPH为内参基因。利用TAKARA的SYBR Premix Ex TaqⅡ试剂进行荧光定量PCR检测，反应体系为SYBR Premix Ex Taq 7.6μL，上下游引物（10μmol·L-1）各0.4μL，ROX DyeⅡ0.4μL，模板2μL，加dd H2O到终体积20μL。反应在ABI7500实时荧光定量PCR仪上进行，染料为SBYR荧光染料。反应程序：95℃预变性30 s；95℃变性5 s，60℃退火延伸34 s，40个循环；将Cs AAP3在LJ43嫩叶中0 h的表达量设为1，计算各处理的倍性关系。每生物学重复设置3次技术性重复，结果采用-2ΔΔCT算法[33]来进行定量数据的计算分析。