《表2 基因荧光定量PCR引物》

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《低蛋白饲粮对断奶仔猪生长性能、消化酶表达及氮排放的影响》

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用TRIzol试剂提取100 mg样品（十二指肠、空肠及胃粘膜，胰腺）总RNA。吸取RNA（1μg）反转录为cDNA（Takara，Cat.#RR047A）。搜索GeneBank中猪的相关基因序列，使用primer premier 5.0（Applied Biosystems，Carlsbad，CA）设计引物（如表2），利用荧光定量方法检测相关基因表达情况。反应体系（20μL）:2μL cDNA，10 L SYBR Green mix，上下游引物各0.8 L（100 nM），6.4μL的ddH2O。Real-time PCR条件:95℃预变性3 min，95℃变性15 s，退火30 s，72℃延伸30 s，扩增39个循环。筛选后利用β-actin作为Real-time PCR的内参基因。