《表2 荧光定量PCR引物》

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《热应激对兔下丘脑-垂体-睾丸轴NMB及其受体基因表达和睾酮分泌的影响》

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采用荧光定量PCR方法，以GAPDH作为荧光定量PCR内源性参照，检测NMB和NMBR mRNA在兔下丘脑、垂体和睾丸中的表达水平。根据SYBR誖Green Master Mix Kit说明书进行操作，RT-PCR反应体系为20μL，反应条件为95℃预变性5 min，95℃变性5 s，60℃退火30 min，72℃延伸15 s，40个循环。荧光定量PCR反应的引物见表2[14]。每个样品c DNA需要检测的基因和内参设立3重复。RT-PCR反应后，根据溶解曲线分析扩增产物的特异性，并用凝胶电泳检测片段大小。