《表1 12个特异性ds RNA片段的合成引物》

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《褐飞虱安全高效RNAi靶基因的筛选及Snf7同源基因的控害效果》

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将筛选到的候选靶基因根据ds RNA引物设计原则，利用Editseq软件分析序列的ORF区，利用primer5.0软件设计包含ORF区的特异性引物（表1）。再将设计得到的序列通过本地blast检测脱靶效应，分别构建含有ds RNA片段的重组质粒，阳性克隆经测序验证后利用质粒提取试剂盒提取重组质粒，分别命名为ds-基因名，按照Promega T7Ribo MAX?Express RNAi System试剂盒的方法合成ds RNA。最后将获得的ds RNA用w=1%的琼脂糖凝胶和Nano Drop ND-2000超微量紫外分光光度计分别进行质量检测和浓度测定，最终将其稀释至5μg/μL，保存于-20℃。