《表3 ITS片段特异引物信息》

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《冬虫夏草及虫草类产品DNA条形码鉴定研究》

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注:终浓度均为0.1μmol·L-1。

实验根据ITS序列分析，利用Primer 5.0设计了2对冬虫夏草菌特异引物ITSSF1/ITSSR1和ITSSF2/ITSSR2。PCR扩增体系采用常用的25μL。实验主要对PCR扩增的退火温度进行了优化:54℃退火30 s和52℃退火30 s可分别扩增到297 bp和136 bp的冬虫夏草菌ITS序列短片段（表3）。采用该扩增条件对冬虫夏草菌、古尼虫草、新疆虫草、下垂虫草、凉山虫草和金蝉花进行PCR检测，电泳图显示（图3），只有冬虫夏草菌可特异扩增到约300 bp和130 bp的目标条带，经测序验证，为冬虫夏草菌。表明本研究设计的特异引物ITSSF1/ITSSR1和ITSSF2/ITSSR2适用于冬虫夏草菌的特异性PCR鉴别。