《表1 sg RNA和引物及其目的片段大小》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《CRISPR/Cas9介导的绵羊示踪脐带间充质干细胞系的建立》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

根据绵羊Rosa26的基因序列分别设计3条正向引物和通用反向引物，利用点突变法（KOD-PlusMutagenesis Kit，Toyobo Life Science Department）构建绵羊ROSA26基因sg RNA/Cas9表达载体：以px330为模板，以KOD-R，s ROSA26-sg RNA1、2、3（表1）为引物分别进行PCR扩增，用DpnⅠ对PCR产物进行消化（去除质粒DNA），随后进行PCR产物自身连接，Trans5α转化并挑取单克隆，碱裂解法小提质粒（高纯质粒小量制备试剂盒Bio Teke）。对突变质粒克隆载体进行BbsⅠ酶切鉴定及测序分析，测序正确的重组质粒分别命名为px330-sg RNA1/2/3，并利用试剂盒（Endo-free Plasmid Mini KitⅡ，OMEGA）提取无内毒素质粒用于后续试验。