《表1 sg RNA和同源臂引物序列》

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《基于CRISPR/Cas9构建Msx1-Cre小鼠模型》

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下划线:sgR NA靶向序列

根据CRISPR/Cas9系统中sg RNA切割原理[7]，sg RNA选择在Msx1基因的ATG后尽量靠近ATG位点。在CRISPR设计网站（https://sg.idtdna.com）上选择打靶分数高且脱靶率低的sg RNA序列。如图1所示，5’端同源臂从ATG起始密码子前开始设计，片段长度1000 bp左右，3’端同源臂选择从sg RNA之后长度1000 bp以上，选择前两三对最高分数的引物对，进行NCBI primer BLAST比对，选择特异性较高的引物（引物序列见表1）。Cre序列则插入在sg RNA切割的靶位点上[8]。同源臂引物序列见表1。