《表1 靶向OAS2基因的sg RNA序列》

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《利用CRISPR/Cas9技术构建OAS2敲除的PK-15细胞系及敲除OAS2对CSFV复制的影响》

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按照LentiCRISPRv2载体信息以及选定的sg R-NA基因序列，设计特异性引物（表1），通过程序性退火将sg RNA引物合成双链DNA；载体LentiCRISPRv2经Bsm BⅠ酶切后回收线性化的载体。用T4 DNA连接酶将退火后的sg RNA双链DNA与线性化的LentiCRISPRv2在室温连接30 min获得重组质粒，分别命名为p LentiCRISPRv2-sgRNA-E1（psgR-NA-E1）和p LentiCRISPRv2-sgRNA-E2（psgRNA-E2），经测序鉴定正确后用于慢病毒包装。