《表1 靶向USE1基因的RNA干扰序列》

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《RNA干扰USE1基因慢病毒载体的构建及鉴定》

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根据NCBI数据库中USE1基因的mRNA序列（NM＿023079），利用Invitrogen公司提供的BLOCK-iTTM RNAi Designer工具，设计靶向USE1基因的shRNA序列。选择5'端以G开头，GC值在35%-55%之间，且靶点序列起始位置不同的三条序列作为候选，如表1所示。根据慢病毒抑制表达载体pLL3.7的特点及要求，在寡核苷酸链最两端加上Bam H I和Xho I酶切位点，并在5'端加上重建U6启动子的T碱基，在shRNA序列后加上Loop环序列TTCAAGAGA，在3'端加上终止序列TTTTTT。