《表1 MS2基因中sg RNA序列》

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《CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥MS2基因突变体的鉴定》

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注:下划线为选中的MS2基因sg RNA靶点序列；Ch3:3号染色体；NA:无错配；Exon:外显子；Intron:内含子Note:Underline:sg RNA target sequence for the selected MS2 gene；Ch3:Chromosome 3；NA:No mismatch；Exon:Coding DNA；In-tron:Noncoding DNA

从NCBI数据库上下载拟南芥MS2基因序列（AT3G11980），利用sg RNA设计软件搜索可能的拟南芥MS2基因的sg RNA序列，根据软件分析结果显示，脱靶位点的PAM类型为“NGG”或“NAG”，初步搜索到的结果中存在无错配以及部分序列或多或少错配的可能性。因此选取其中一条没有错配的正义链序列作为拟南芥MS2基因的sg RNA靶点序列（表1），通过比对发现该位点处于基因ORF序列的1 227~1 246 bp位置。利用该靶点序列设计引物MS2-F（A TTGTACGGGAAGGGGCAACTCAC）和MS2-R（AA ACGTGAGTTGCCCCTTCCCGTA）。