《表2 引物Table 2 Primers》

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《CRISPR/Cas9介导靶向敲除拟南芥MS2基因突变体的鉴定》

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根据NCBI数据库公布的拟南芥MS2基因的基因组序列（AT3G11980），利用sg RNA设计软件http://cbi.hzau.edu.cn/cgi-bin/CRISPR设计拟南芥MS2基因的sg RNA靶点序列。按照正向引物5&apos；ATTG+正向靶点序列；反向引物5&apos；AAAC+反向靶点序列的格式进行引物的合成。将合成的引物MS2-F和MS2-R（表2）进行退火，BbsⅠ单酶切p EN-Chimera载体，回收退火引物以及载体酶切后产物，T4DNA连接酶连接过夜并转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，涂布Amp 100μg/m L的LB营养琼脂抗性平板并进行转化子筛选。转化子利用S215和S216引物（表2）进行菌落PCR验证和测序确认。从而形成带有MS2靶序列的sg RNA入门载体p EN-MS2。