《表1 VHH基因巢氏PCR引物序列》

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《羊驼免疫库的制备及抗孔雀石绿纳米抗体的筛选》

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参考张玉琪等[14]方法设计巢氏PCR引物（表1），按照PCR试剂盒说明书进行扩增。第1轮扩增总体积为50μL。扩增流程为：95℃预变性5 min；95℃变性30 s，57℃退火30 s，72℃延伸30 s，共30个循环；最后72℃延伸7 min。第1轮扩增产物通过凝胶电泳鉴定，并用胶回收试剂盒回收目的条带。将胶回收产物作为模板进行第2轮扩增，扩增体系为50μL。扩增流程为：95℃预变性5 min；95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共15个循环；最后72℃延伸7 min。将PCR产物使用Pure Cycle kit纯化。