《表5 实时荧光定量PCR引物》

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《基于转录组测序的硒处理银杏萜类合成的关键基因表达分析》

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利用实时荧光定量PCR技术检测6个转录因子在不同硒处理方式的表达量，以检验转录组测序的可靠性。应用Primer 5.0设计荧光定量PCR引物，由南京金斯瑞生物科技有限公司合成（表5），GAPDH基因为内参基因。由于基因的转录水平的表达量是短时间内会有较大变化，因此以处理完一周的时间进行第一次采样，之后每两周采集一次，共6次采样，用做于实时荧光定量PCR。依据前述方法与设置，提取银杏叶片RNA，用Aidlad TRUEscript RT kit反转录合成c DNA，随后进行q RT-PCR实验。实时荧光定量PCR反应体系为25μL:2×SYBR Green Realtime PCR Master Mix 12.5μL，正、反引物各0.5μL，c DNA模板1μL，水10.5μL。反应条件为：95℃15 s，60℃20 s，72℃30 s，共40个循环。反应在ABI 7500实时荧光定量PCR仪上完成，每个样品3个重复。各基因相对表达量的计算采用2-ΔΔCt方法。