《表1 RT-q PCR引物序列》

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《外源24-表油菜素内酯对茶树光合特性的影响》

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叶片总RNA的提取按照北京华越洋生物科技有限公司Quick RNA Isolation Kit试剂盒说明书进行，并用上海谱元仪器有限公司Nano Drop ND 1000微量紫外检测仪测定其浓度，电泳检测其完整性。使用大连Ta Ka Ra公司Prime Script RT Reagent Kit试剂盒合成c DNA第一链。CFX96TM real-time PCR system为实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR，RT-q PCR）平台，采用RT-q PCR分析不同浓度EBR对茶树基因表达的影响。叶绿素合成基因的引物序列参照Yu等[16]的方法。根据BR合成酶基因的注释[17]，碳同化关键酶基因的注释[18]，结合茶树基因组数据库（http://tpia.teaplant.org/index.html），查找库中与BR合成酶和碳同化关键酶相关的基因序列，以Cs ACT7为内参基因[19]，并利用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物（表1）。所用引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。RT-q PCR扩增体系为20μL，包括1μL c DNA模板、7μL dd H2O、10μL SYBR Premix Ex Taq酶、1μL正向引物和1μL反向引物。RT-q PCR反应条件：95℃30 s；95℃变性5 s，60℃退火30 s，40个循环；65℃10 s。基因相对表达量采用法计算[20]。