《表1 RT-q PCR引物序列》

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《槲皮素对17α-乙炔雌二醇诱导胆汁淤积的肝保护作用研究》

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注：NTCP为钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白；OATP为有机阴离子转运多肽；BSEP为胆汁酸盐输出泵；MRP为多药耐药相关蛋白；CYP为细胞色素P450酶；SULT2A1为硫酸基转移酶2A1；UGT1A1为尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1

采用RT-q PCR法测定胆汁酸摄取转运体[钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白（sodium taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP）和有机阴离子转运多肽（organic anion transporting polypeptide，OATP)1A2和OATP1B1]、外排转运体[胆汁酸盐输出泵（bile salt export pump，BSEP）、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein，MRP)2、MRP3和MRP4]、胆汁酸合成酶[细胞色素P450酶（cytochrome P450，CYP)7A1、CYP8B1和CYP27A1]及代谢酶[CYP3A2、CYP2B10、硫酸基转移酶（sulfotransferase，SULT)2A1和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UDP-glucuronosyl transferases，UGT)1A1]的m RNA表达情况。将40 mg左右的肝脏组织置于玻璃匀浆器中，加入500μl Trizol试剂，冰上研磨，移取液体至EP管中，加入200μl氯仿，用手上下剧烈震荡15 s，放置15 min。随后在冷冻离心机中12 000 g 4℃离心15 min。取上清液，加入等量的异丙醇，震摇混匀后，静置10 min，12 000g 4℃离心10 min，倒去液体，加入75%乙醇溶液，涡旋洗涤沉淀，8 000 g 4℃离心5 min，尽量吸干乙醇溶液，晾干，沉淀未完全干燥时加入60μl PCR水。使用核酸测定仪测定RNA纯度及浓度，使用逆转录试剂盒将总RNA逆转录为c DNA。使用荧光定量试剂盒，采用两步法PCR程序扩增，记录数据，以β-actin为内参计算相对表达。引物序列见表1。