《表1 RT-q PCR引物序列》

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《口腔鳞状细胞癌组织中环状RNA的差异表达谱分析》

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根据芯片分析结果选出的差异表达circ RNA分子中，挑选6个差异变化明显的circ RNA分子，以β-actin作为内参，采用SYBR Green法进行RT-q P-CR验证。取1μg RNA，按照Prime Script反转录试剂盒说明书，将RNA逆转录为c DNA。RT-q PCR反应体系为20μL，引物序列见表1。反应体系包括:1×SYBR Green I master-mix、0.5μmol/L特异正向引物、0.5μmol/L特异反向引物、1μL反转录产物。反应条件为:预变性95℃10 min，95℃15 s，60℃1 min，72℃30 s，40个循环，通过熔解曲线检测PCR产物的特异性。RT-q PCR检测使用ABI7500仪器进行。每孔均设3个复孔，取平均Ct值作为该样本最后Ct值，以β-actin基因作为内参基因，计算2-△△Ct值反映circ RNA的相对表达水平。