《表1 RT-q PCR引物序列》

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《高度浓缩生长因子对MC3T3-E1成骨细胞生物学性能的影响》

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按照上述方法将细胞重悬后，用成骨诱导液诱导。7 d后，按照试剂盒RNAiso Plus说明书提取总RNA，紫外-可见光分光光度计检测总RNA纯度及浓度，测得各组A260/A280值均在1.7～2.1之间，表明总RNA纯度较高。按照反转录试剂盒说明书合成c DNA。内参GAPDH以及目的基因Runx2引物由上海生工生物公司合成（表1)，RT-q PCR反应采用荧光染料法（参照SYBR Premix Ex Taq说明），选择20μL体系：SYBRⅡ10μL，上游引物0.8μL，下游引物0.8μL，RT反应液1.6μL，DEPC水6.8μL。反应条件为：95℃预变性30 s，1个循环；95℃变性5 s，60℃退火30 s，45个循环。收集荧光信号，进行熔融曲线分析。采用荧光阈值代表RT-q PCR结果，根据（2-ΔΔCt）计算目的基因表达量，定义对照组基因表达量为1，计算每组基因的相对表达量。