《表1 用于扩增ITS、TEF 1、Alt al、endo PG、GAPDH和His 3的引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《我国梨产区引起黑斑病的链格孢种类鉴定与致病性研究》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

（1)DNA提取与检测。采用CTAB法提取基因组DNA，用1.2%的琼脂糖凝胶、1×TAE缓冲液电泳检测DNA样品。（2）目的基因的扩增与测序。选择核糖体转录间隔区序列（internal transcribed spacer，ITS）与延伸因子（translation elongation factor 1-alpha，TEF 1）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、内聚半乳糖醛酸酶基因（endopolygalacturonase，endo PG）、链格孢过敏原基因（Alternaria major allergen gene，Alt al）、组蛋白基因（histone 3，His 3)[16]进行扩增与测序。各基因的扩增引物及其序列见表1。PCR扩增反应程序：预变性94℃5 min，变性94℃30 s，延伸72℃30 s，补充延伸72℃5 min，退火温度ITS、TEF 1、GAPDH、endo PG、Alt al、His 3分别为52℃、52℃、59℃、54℃、59℃、66℃反应30 s，共35个循环。反应体系：10×Taq Buffer（Mg+Plus）5 m L，d NTPMixture（2.5 mmol·m L-1）1 m L，上下游引物各1 m L，Ta Ka Ra Taq（5 U·m L-1）0.25 m L，c DNA 2.0 m L，dd H2O 39.75 m L，总体积50 m L。（3）多基因分子系统学分析。采用DNAMAN7软件对核苷酸序列进行多重比对，然后将序列输入Gblocks在线软件进行剪切。使用遗传进化软件MAGA 5.2，采用最大简约法（Maximum Parsimony，MP）和Mr Bayes 3.1.2进行系统进化分析，所用19条标准菌株Gen Bank登录号见表2。使用Mr Model T-est软件，选择Mr Bayes运行最适模型。ITS、GAP-DH、Alt a1、TEF 1、endo PG、His 3基因最适核苷酸替代模型分别为K80、GTR、HKY+G、K80+I、K80+I、GTR。