《表1 扩增ITS、LSU、rpb2和TEF1序列的引物序列》

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分别使用引物对ITS1F/ITS4、LR0R/LR5、RPB2-5F2/fRPB2-7cR和elongation-1F/elongation-1R进行PCR,扩增ITS、LSU、rpb2和TEF1序列,引物(表1)委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。PCR反应体系50μL:Premix TaqTM(TaKaRa公司)25μL,基因组DNA 3μL,10μmol/L上、下游引物各3μL,ddH2O 16μL。扩增程序:95℃预变性2min;95℃45 s,退火45 s(ITS和LSU,48℃;rpb2,56℃;TEF1,60℃),72℃1.5 min,进行35个循环;72℃延伸10 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后,送生工生物工程(上海)股份有限公司进行序列测定。将获得代表性菌株的ITS、LSU、rpb2和TEF1序列进行BLASTn同源性比对,将序列提交NCBI/GenBank获得基因登录号。