《表1 引物序列和扩增条件》

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《miRNA介导沉默Oct4基因对肿瘤细胞SCF/c-kit、IL-6/IL-6st信号传导及凋亡的影响》

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转染和空白对照组人宫颈癌HeLa细胞均用TRIzol Reagent(Ambiori，Life Technologies）提取总RNA，用AMV反转录酶（Promega）试剂盒制备cDNA。制备cDNA反转录反应体系25μl为基准，反应缓冲液中添加2μg总RNA，在70℃变性5 min，接着在0℃冷却2 min，随后添加反转录酶在42℃合成cDNA 30 min。在85℃处理5 min结束反应。为了扩增目标基因片段，根据从NCBI基因数据库中获取的相关基因（Oct4、SCF、c-Kit、IL-6、IL-6st(gp130）、Bax、Bcl-2）特异序列合成目标基因扩增引物（表1），在不同扩增条件下扩增其基因片段。目标基因片段的扩增使用了BIO-RAD PCR仪（MyCycler-580BR，USA）和2×Es Taq Master Mix(CW BIOtech）试剂盒。PCR仪扩增条件设定为94℃预变性4 min，在94℃变性30 s、50～55℃退火40 s、72℃延伸40 s。此过程重复37个循环。最终在72℃延伸7 min结束扩增。扩增产物在2%琼脂糖凝胶中进行电泳分离，用凝胶成像系统（WD-9413B，6.1，北京）进行观测，并拍照记录。