《表1 根据香鱼格留虫β-tubulin基因序列设计引物和DNA探针序列》

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《香鱼格留虫(Glugea plecoglossi)环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测方法的建立》

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注:a表示上游内引物Gpl-FIP的5′端用生物素标记；b表示探针Gpl-HP的5′端用异硫氰酸标记

参考Gen Bank上已有的香鱼格留虫β-tubulin基因序列，设计特异性引物Gpl-PF1与Gpl-PR1（表1），以香鱼格留虫的基因组DNA为模板，扩增β-tubulin基因。按照琼脂糖凝胶回收试剂盒的说明（Omega Gel Extraction Kit，USA）回收PCR产物，将其与p MD19-T Vector载体连接，构建重组质粒p MD-BT，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并涂板。挑取单克隆并测序，鉴定准确后提交NCBI （Gen Bank登录号:MN811004）。按照质粒提取试剂盒（Omega Plasmid Mini Kit，USA）的说明提取质粒p MD-BT，经Nano Drop2000测定浓度后，稀释至1.0ng/μL，作为p MD-BT质粒标准品备用。