《表1 本研究中用于设计引物和Taq Man探针的瘰螈物种DNA样品及其Cyt b基因序列在NCBI Gen Bank的检索号》

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《香港瘰螈eDNA引物和TaqMan探针的设计与确认》

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考虑到本研究目标物种只有香港瘰螈，因此只需设计对该物种特异性高的引物。引物对目标物种的特异性越强，PCR时产生非目标物种的扩增机会就越小。为了提高特异性，同时设计TaqMan探针（Smith et al.2009）。为了保证设计的引物和探针不会与香港瘰螈亲缘关系较近的其他物种产生反应，设计时基于瘰螈属的系统发育关系（Yuan et al.2014），采用10种共11只近缘瘰螈物种的DNA作为假阳性样本，以及12只香港瘰螈的DNA(Lau et al.2016）作为阳性样本，共计23个样本（表1）。香港渔农自然护理署提供许可证允许采集样本。