《表1 本研究所用引物列表（CMV-Fny Gen Bank登录号：D10538)》

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《黄瓜花叶病毒RNA3基因间隔区的功能研究》

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突变体构建如下（图2)，Wt代表了包含完整IGR的RNA3侵染性克隆，pΔ3'UTR、pΔ5'UTR和pΔAll分别代表缺失IGR 3'UTR、IGR 5'UTR和IGR全部序列的RNA3侵染性克隆。跨越缺失的虚线部分，通过基因合成的方法将标红的序列连接在一起，连接到克隆载体上，即得到p UC57-Δ3'UTR、p UC57-Δ5'UTR、p UC57-ΔAll质粒（由安徽通用生物系统有限公司合成）。p UC57-Δ3'UTR、p UC57-Δ5'UTR、p UC57-ΔAll经Mun I和Sal I(Takara）双酶切及电泳后，回收小片段，p Cass4-Rz-CMV-FnyRNA3经Mun I和Sal I双酶切后回收载体片段，通过T4DNA连接酶（Takara）将缺失突变的基因间隔区连接到p Cass4-Rz载体上，经克隆后挑斑，采用检测IGR全长的引物对Fny IGRd F和Fny IGRd R（表1，所有引物由南京金斯瑞合成）进行菌液PCR，反应条件为95℃，5 min；循环35次：95℃20s，50℃30 s，72℃1 min；72℃10 min；经电泳后筛选出含有重组质粒p Cass4-Rz-CMV-Δ3'UTR、p Cass4-Rz-CMV-Δ5'UTR和p Cass4-Rz-CMV-ΔAll的菌液，转接于含卡那抗性的培养基中，37℃震摇12 h，次日用质粒提取试剂盒（Sangon）提取质粒。