《表3 香港瘰螈特异性引物和Taq Man探针在NCBI网站上的比对结果》

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《香港瘰螈eDNA引物和TaqMan探针的设计与确认》

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23个瘰螈属样本的Cyt b基因全部成功扩增及测序，全部序列已上传到NCBI Gen Bank基因数据库（表1）。基于这些序列，采用生物信息软件Primer Express Software 3.0比对及计算后，设计出的香港瘰螈特异性引物和Taq Man探针与其他10种瘰螈11个Cyt b基因序列均有变异位点，只会与本研究中12个香港瘰螈的Cyt b基因序列完全匹配，扩增出长度为94 bp的PCR产物并释放荧光信号（表2和图1）。此外，将引物及探针序列在NCBI网站上进行比对分析，仅与香港瘰螈有100%的同源性及100%的序列覆盖率（表3），进一步确认所设计的引物和探针并不会产生非目标物种的扩增。