《表5 不同引物和探针浓度下的q PCR效率和标准曲线结果》

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《香港瘰螈eDNA引物和TaqMan探针的设计与确认》

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y表示以10为底的对数之香港瘰螈PHK-OP Cyt b合成DNA拷贝数；x表示qPCR扩增反应后的Ct值。

引物和探针的浓度是q PCR扩增体系中的关键因素之一，不同的引物和探针在同一q PCR反应体系中形成竞争关系。测试了不同引物和探针浓度组合（表5），发现在每种引物0.5μmol/L和探针0.6μmol/L情况下能得出最佳q PCR效率，为93.9%，且在40个循环反应内的最低检测限为10个拷贝数。最佳标准曲线（图2）的相关系数R2=0.99，回归方程为y=﹣0.2876x+11.793，说明本研究在稀释的PHK-OP Cyt b合成DNA浓度范围内具有良好的线性关系，所建立的标准曲线能够正确反映出香港瘰螈Cyt b基因的扩增。