《表1 MGB探针和PCR引物序列》

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《HLA-DP基因多态性与HCV患者抗病毒治疗免疫应答的相关性分析》

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采用Taqman-MGB荧光探针实时定量PCR法以7900HT型实时荧光定量PCR仪对HLA-DP基因rs3077和rs2395309两个位点的分型进行扩增，探针和引物序列如表1所示（表中，“FAM”“HEX”分别为6-羧基荧光素和六氯-6-甲基荧光素探针5′端荧光基团，“MGB”为小沟结合探针3′端荧光猝灭基团，“P-G/A/C/T”为磷酸化碱基对）。反应体系（总体积5μL):2×PCR MaterMix 2.5μL，10 ng/μL DNA模板1μL，20 pmol/μL上、下游引物各0.225μL，10 pmol/μL探针0.125μL，用ddH2O加至5μL。反应条件：95℃预变性2 min，95℃变性15 s，60℃退火60 s，72℃延伸40 s，共40个循环；72℃再延伸5 min。运用7900HT型实时荧光定量PCR仪和配套SDS 2.3软件对扩增结果进行分析。根据荧光信号确定基因型，当含有FAM或HEX的探针与待测序列互补时，FAM或HEX的荧光基团被游离，仪器检测到荧光信号，其中FAM荧光信号表示含C、G等位基因，HEX荧光信号表示含A、T等位基因。当仅有FAM信号时，代表纯合子CC或GG；当仅有HEX信号时，代表纯合子AA或TT；当FAM和HEX信号同时增强时，代表杂合子CT或GA。