《表1 基孔肯雅病毒和寨卡病毒qRT-PCR引物和探针序列》

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《一例基孔肯雅病毒和寨卡病毒混合感染病例的发现》

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注：a基孔肯雅病毒和寨卡病毒的引物及探针设计参考序列分别为基孔肯雅病毒（GenBank登录号GU199350），寨卡病毒（GenBank登录号KJ776791)

基孔肯雅病毒和寨卡病毒荧光RT-PCR检测方法由本实验室建立。比较分析从GenBank上获得的基孔肯雅病毒和寨卡病毒的全基因组核苷酸序列，分别选取基孔肯雅病毒E2-6K-E1区和寨卡病毒PreM区核苷酸保守性的片段作为2种病毒属特异性引物和探针设计的区域，具体引物和探针序列见表1。荧光RT-PCR试剂选用Thermo Fisher公司的Ag-Path-IDTMOne step RT-PCR kit（AM1005）试剂盒，反应体系和反应条件如下：2×RT-PCR Buffer 12.5μL，引物混合液5μL(CHKf/ZIKf、CHKr/ZIKr、CHKp/ZIKp的终浓度分别为0.4μM、0.4μM、0.2μM），25×RT-PCR Enzyme Mix 1μL，RNA 5μL，补充DEPC水2.5μL至总体系25μL。在QuantStudio6 Flex荧光PCR仪上的反应扩增程序为：50℃10 min，95℃10 min；95℃15 s→60℃45 s(45个循环）。