《表1.本研究所用的引物：基于small RNA组学分析揭示意大利蜜蜂响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的免疫应答机制》

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《基于small RNA组学分析揭示意大利蜜蜂响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的免疫应答机制》

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参照Chen等[42]和郭睿等[34]的方法，随机挑选13个novel miRNA（novel-m0008-3p、novel-m0019-5p、novel-m0003-3p、novel-m0018-5p、novel-m0006-3p、novel-m0005-3p、novel-m0043-5p、novel-m0022-3p、novel-m0033-3p、novel-m0040-3p、novel-m0026-5p、novel-m0031-3p、novel-m0001-3p）进行表达验证，利用DNAMAN 8软件设计novel miRNA的Stem-loop引物、特异性上游和通用下游引物，委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物信息详见表1。利用RNA抽提试剂盒（Promega公司，美国）提取Am7CK、Am7T、Am10CK和Am10T样品的总RNA，利用Stem-loop引物反转录得到相应的cDNA预混，作为PCR的模板。PCR反应体系（20μL）包括cDNA 1μL，上下游引物各1μL，dH2O 7μL，PCR mix 10μL；PCR程序设置：94°C5 min；94°C 30 s，50°C 40 s，36个循环；72°C1 min。PCR产物经1.8%琼脂糖凝胶电泳检测，利用凝胶成像系统（上海培清，中国）观察和拍照。