《表1 本研究使用的引物：东方蜜蜂微孢子虫孢子中长链非编码RNA的竞争性内源RNA调控网络及潜在功能》

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《东方蜜蜂微孢子虫孢子中长链非编码RNA的竞争性内源RNA调控网络及潜在功能》

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通过Stem-loop RT-PCR验证对ce RNA调控网络中3个靶miRNA（nce-miR-7502、nce-miR-7729和nce-miR-8565）的表达进行验证。利用RNA抽提试剂盒（Ta Ka Ra公司，日本）提取东方蜜蜂微孢子虫孢子的总RNA。参照郭睿等[25]和杜宇等[26]的方法，利用DNAMAN软件（LynnonBiosoft公司，美国）设计mi RNA的Stem-loop引物、上游和下游引物，委托上海生工生物工程有限公司合成引物（表1）。利用Stem-loop引物经反转录得到c DNA，作为模板进行PCR扩增。PCR体系（20μL）：上下游引物（1.67μmol·L-1）和c DNA模板各1μL，PCR mix 10μL，无菌水7μL。将DEPC水设为阴性对照，反应体系（20μL）:DEPC水模板1μL，上述3个靶mi RNA的混合上游引物0.9μL（每种0.3μL）、混合下游引物0.9μL（每种0.3μL)，PCR mix 10μL，无菌水7.2μL。PCR程序：95℃5 min；95℃30 s，46℃30 s，72℃1min，35个循环；72℃10 min。PCR产物经1.6%琼脂糖凝胶电泳检测。