《表1 边坡计算参数取值：蜜蜂球囊菌中长链非编码RNA的调控作用》

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《蜜蜂球囊菌中长链非编码RNA的调控作用》

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根据1.6中靶向预测的结果，随机选取9个调控网络中的lnc RNA（MSTRG.6443.1、MSTRG.2135.1、MSTRG.2134.1、MSTRG.3422.1、MSTRG.2302.1、MSTRG.5023.1、MSTRG.5584.1、MSTRG.1870.1和MSTRG.1614.1）和8个靶m RNA(gene2674、gene4126、gene4125、gene1602、gene5384、gene1986、gene989、和gene1970）进行RT-PCR验证。根据上述lnc RNA和m RNA的核酸序列，利用Primer Primer 5.0软件设计相应的特异性引物，委托上海生工生物工程有限公司合成引物（表1）。选取actin(gene6001）作为lnc RNA和m RNA的内参基因（阳性对照）。将9对lnc RNA（或8对m RNA）特异性上游引物（1μL/种）和下游引物（1μL/种）混合，以无菌水为模板进行RT-PCR，作为阴性对照。利用RNA抽提试剂盒（Ta Ka Ra公司，日本）分别提取球囊菌菌丝的总RNA和孢子的总RNA，将1μg菌丝RNA与1μg孢子RNA等量混合，作为模板进行反转录，得到的c DNA作为模板进行PCR。PCR反应体系（20μL）:c DNA模板1μL，上游引物1μL，下游引物1μL，Mixture 10μL，无菌水7μL。PCR程序：95℃预变性5 min；95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共34个循环；72℃再延伸5 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像仪（上海培清，中国）检测。