《表1 用于Real-time PCR的引物》

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《蝙蝠葛碱抑制人胰腺癌SW1900细胞系增殖及诱导其凋亡》

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SW1900细胞完全贴壁后细胞孔里分别加入终浓度为0、6、12 mg/L蝙蝠葛碱的完全培养基100μl。培养24 h后，弃培养液。采用Trizol总RNA提取试剂提取细胞的总RNA，再利用一步法反转录荧光定量试剂盒检测磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）、Bcl-2的表达情况，内参基因β-actin和GAPDH。反应体系:第1步2×Real-time PCR混合物10μl，正向引物（10μmol/L）0.4μl，反向引物（10μmol/L）0.4μl，反转录酶混合物0.65μl，RNA模板0.1～100 ng、用ddH2O补足20μl。反应程序:反转录50℃5 min，预变性95℃3min，变性95℃10 s，退火/延伸/采集荧光信号60℃30 s 40循环，Real-time PCR仪自动生成熔解曲线。2-△△Ct方法[11]进行相对定量分析。以无模板和无转录反应模板作阴性对照，见表1。