《表1 Real-time PCR的引物序列》

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《酸环境对大鼠髓核细胞自噬及功能的影响》

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将细胞分为Control组、NC-shRNA组、O-GR1-shRNA1组、OGR1-shRNA2组和OGR1-shRNA3组，分别为无处理、转染NC-shRNA、转染OGR1-shRNA1、转染OGR1-shRNA2和转染OGR1-shRNA3。使用Real-time PCR方法分析各组OGR1 mRNA表达水平。按试剂盒说明操作，通过TRIzol提取NPCs的总RNA，进行浓度和纯度测定后，使用1μg的总RNA进行逆转录来合成cDNA。制备20μl的反应体系，分别是2μl的2倍稀释的cDNA，10μl 2×的SYBR Premix Ex Taq的混合液，0.2μmol/L的引物，无菌水进行补足。引物如表1所示。将上述20μl的反应体系加入8联管中，放到LightCycler实时定量PCR系统（Roche，Mannheim，Germany）进行反应，反应程序为：95℃预变性10min，95℃变性15s，56℃退火1min，72℃延伸1min，共40个循环。反应结束后导出Ct值，并根据内参基因GAPDH进行标准化，mRNA的半定量使用2-ΔΔCt的方法进行计算。应用Western blotting检测蛋白表达。