《表1 real-time PCR引物》

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《副干酪乳杆菌SMN-LBK在乙醇胁迫下的转录组分析》

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按照TaKaRa逆转录试剂盒说明书合成第1链cDNA，real-time PCR所用的引物见表1，其中16S rRNA作为内参基因，采用ddH2O作为阴性对照。按照UltraSYBR Mixture说明书进行real-time PCR。real-time PCR体系（20?μL）：荧光染料混合液10?μL、正向引物0.4?μL、反向引物0.4?μL、cDNA模板0.8?μL、用ddH2O补足至20?μL。real-time PCR程序：95℃预变性10 min，95℃变性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸32 s，循环40次；溶解曲线分析：95℃变性15 s，60℃退火1 min，95℃荧光信号采集15 s，60℃冷却15 s。每个样品设置3次平行。利用2-ΔΔCt法分析基因的相对表达量，使用SPSS 19.0进行统计学差异的显著性分析。