《表1 引物序列及用途:禾谷炭疽菌CgRab5A的亚细胞定位研究》

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《表1 引物序列及用途:禾谷炭疽菌CgRab5A的亚细胞定位研究》
《禾谷炭疽菌CgRab5A的亚细胞定位研究》

本实验中用到的引物序列如表1所示。其中CgRab5A-PF/PR首先通过在线网站预测CgRab5A的启动子可能在ORF区域上游2700bp左右的位置(Score值为1.084),因此选定ORF上游大概3000bp核苷酸用Primer5设计引物得到CgRab5A-PF/PR,并在其CgRab5A-PF前面加上pKNT XhoI无缝接头序列GGG-TACCGGGCCCCCCCTCGAG,在CgRab5A-PR前面加上GFP的前接头TCCTCGCCCTTGCTCACCAT。GFP片段的扩增引物GFP-F/R则是从GFP序列中起始密码子和去除终止密码子后开始各取20个碱基得到的。CgRab5A片段扩增的前引物CgRab5A-OF是从起始密码子开始取20个碱基,并在前面加上GFP的后接头CACTCACGGCATG-GACGAGCTGTACAAG获得的,而扩增的后引物则是用Primer 5对CgRab5A的ORF和3′端UTR序列进行设计获得,并在CgRab5A-OR前面加上pKNT EcoRI无缝接头CCCCCGGGCTGCAGGAATTC。

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