《表1 引物及DNA序列：酿酒酵母全基因组SNARE蛋白的亚细胞定位研究》

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《酿酒酵母全基因组SNARE蛋白的亚细胞定位研究》

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首先用Stu1-F/R和Snab1-F/R两对引物（表1）为BS-Ura3Kl质粒载体引入Stu I、Sna BI两个酶切位点。分别以酵母基因组及质粒BS-Ura3-GFP-Atg8为模板，通过PCR获得启动子、ORF和GFP的基因片段（引物见表1），并利用Bam HI和Eag I内切酶线性化BS-Ura3Kl质粒载体，然后经过琼脂糖凝胶电泳回收载体核酸片段。将得到的片段同源重组后转入到DH5α感受态细胞，用含有氨苄青霉素（ampicillin）的LB培养平板进行筛选。最后从菌落PCR验证结果为阳性的菌株中提取质粒（表2），并送往Genewiz公司测序。