《表1 荧光定量PCR引物序列》

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《ADAM10抑制剂GI254023X对CCRF-CEM和Molt4细胞增殖与凋亡的作用及机制研究》

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将对数生长期的CCRF-CEM及Molt4细胞以2×109个/L密度分别接种于24孔板。CCRF-CEM细胞实验组加入30μmol/L GI254023X，Molt4细胞实验组加入20μmol/L GI254023X，同时各对照组加入等量DMSO溶剂，每孔设3个复孔，于培养箱中培养6、12和24h后离心收集细胞，根据TRIzol法RNA分离试剂盒说明书提取总RNA，按M-MLV逆转录酶说明书推荐的条件合成cDNA。采用LightCycler 480 SYBR Green I Master试剂检测CCRF-CEM及Molt4细胞Bcl-2、c-Myc、Mcl-1、BAD、BAK和Hes-1的转录水平，所使用引物详见表1。实时定量PCR循环参数:95℃变性5 s，60℃退火，延伸40 s，共40个循环。GAPDH为内参，各组Ct值与GAPDH的Ct值相减得到△Ct，用2-△△Ct方法计算Bcl-2、c-Myc、Mcl-1、BAD、BAK及Hes-1基因表达量。独立的实验重复3次。