《表1 qRT-PCR的引物序列》

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《未羧化骨钙素对高糖条件下小鼠骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化的调控效应》

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第3代骨髓间充质干细胞汇合率接近70%-80%时进行传代，培养基换成成骨（或成脂）分化诱导培养基，同样分为上述4组，培养7 d进行q RT-PCR实验：弃去培养基，PBS清洗3次，按照总RNA提取试剂盒从骨髓间充质干细胞中提取总RNA，Nanodrop检测RNA的含量。根据试剂盒TransScript One-Step RT-PCR SuperMix说明书以RNA为模板反转录成cDNA，Nanodrop检测c DNA浓度；调节c DNA浓度，按照说明书建议的20μL体系，在96孔板中加入不同的引物及其他组分，使用GAPDH作为内参基因来标准化mRNA的表达水平，每组做3个技术重复。qRT-PCR仪进行qRT-PCR，循环条件设定如下：95℃温育5 min，94℃变性30 s，56℃退火30 s和72℃延伸30 s，40个循环。使用ABI GeneAmp 5700 SDS软件比较每个基因样本水平。引物序列见表1。