《表1 K195位点饱和突变引物》

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《饱和突变提高肌酸酶热稳定性》

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注：蓝色字体为突变位点

以前期实验室保存的pET-20J质粒为模板[14]，设计两条引物（见附表1)，利用突变引物通过重叠延伸PCR引进突变点。将相应的重叠延伸PCR产物Dpn I消化2 h，除去模板质粒后进行柱回收并转入感受态E.coli JM109中，挑取单菌落培养并提质粒测序。将正确突变质粒利用化学法转入E.coli BL21（DE3）感受态细胞中进行表达。实验所需的突变引物均由上海生工合成。